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基于shRNAi技术改造细胞系及其在高效生产猪流行性腹泻病毒疫苗中的应用
应用领域:生物与新医药
我有意向
国家/地区
中国
行业领域
生物与新医药
简介
本研究根据合同书的内容,首先尝试用CRISPR技术对Vero E6细胞的p53基因进行knock out,实现对Vero E6细胞的改造,但实验结果发现,knock out Vero E6细胞的p53基因,不利于Vero E6细胞的生长, knock out p53基因的Vero E6细胞株,在形成单克隆后,继续扩大培养过程中,细胞停止生长,最终细胞裂解死亡。因此,我们又采用RNA干扰技术,对Vero E6细胞的p53基因进行knock down,以期改变Vero E6细胞周期,筛选出有效增殖PEDV的Vero E6细胞株,为体外培养PEDV提供了一个改良的细胞株,为大规模生产PEDV疫苗提供了一个可靠的备选细胞株。对照合同书内容完成了针对p53基因的有效siRNA筛选,并构建了相应的RNAi质粒,通过细胞转染和G418筛选获得了稳定细胞株 — p53-Vero E6细胞;优化了PEDV的Real-time PCR检测方法,并且分析发现,PEDV在改造后的Vero E6-p53细胞株中的病毒拷贝数与Vero E6细胞株相比有所增加。
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