简介
本研究根据合同书的内容,首先尝试用CRISPR技术对Vero E6细胞的p53基因进行knock out,实现对Vero E6细胞的改造,但实验结果发现,knock out Vero E6细胞的p53基因,不利于Vero E6细胞的生长, knock out p53基因的Vero E6细胞株,在形成单克隆后,继续扩大培养过程中,细胞停止生长,最终细胞裂解死亡。因此,我们又采用RNA干扰技术,对Vero E6细胞的p53基因进行knock down,以期改变Vero E6细胞周期,筛选出有效增殖PEDV的Vero E6细胞株,为体外培养PEDV提供了一个改良的细胞株,为大规模生产PEDV疫苗提供了一个可靠的备选细胞株。对照合同书内容完成了针对p53基因的有效siRNA筛选,并构建了相应的RNAi质粒,通过细胞转染和G418筛选获得了稳定细胞株 — p53-Vero E6细胞;优化了PEDV的Real-time PCR检测方法,并且分析发现,PEDV在改造后的Vero E6-p53细胞株中的病毒拷贝数与Vero E6细胞株相比有所增加。