一、研究背景：肺炎链球菌（Streptpcoccuspneumonias,S.Pn）是一种定植于正常人鼻咽部的革兰阳性α-溶血兼性厌氧菌，可引起侵袭性肺炎链球菌病（IPD）如肺炎、菌血症和脑膜炎，儿童、老年人和免疫低下人群的发病率高。全球每年约有500万5岁以下儿童死于肺炎，其中肺炎链球菌是主要的致病因素，中国病例数是全球感染例数最多的国家之一。肺炎链球菌感染是一个重要的公共卫生问题，免疫预防一直被认为是一个主要目标。制备有效的荚膜多糖疫苗，以防止肺炎链球菌感染，但其效力是有限的。随着新增感染血清型的出现，多糖疫苗的乱用造成疫苗内血清型菌株出现耐药性，导致疫苗免疫保护效果下降。肺炎链球菌蛋白疫苗具有能扩大免疫保护范围的可能。单一的表面蛋白组成的疫苗只具有一定的交叉免疫保护效果，但能预防的血清型实在有限。研究表明，表面蛋白(pspA)和表面粘附素(psaA)的联合应用能增强机体对肺炎链球菌的清除，并且能同时减少其在鼻咽部的寄居繁殖，有效降低肺炎链球菌的感染机率，这就证实了表面蛋白（pspA）和溶血素（ply）的联合注射能更好地防止菌血症和败血症的发生。神经氨酶A（nanA）是获取糖的关键酶，它对内皮细胞的粘附和侵袭是必需的。依赖自溶素（lytA）在细胞分裂过程中自然降解细胞壁，ply才能从细胞质中释放出来。检测肺炎链球菌血清型及5种毒力因子ply，pspA，nanA，psaA，lytA，为制备肺炎链球菌新型疫苗及疾病预防提供有利的科学依据。近些年，随着分子生物学技术的提高，病原微生物的分子方法应用已成为临床诊断研究中的一个热点课题。我院检验科微生物检验室与分子生物室设备齐全，分子生物技术是整个肇庆市的先驱，占有领先地位。 二、研究的方法、结果与结论：本课题选取2016年4月至2018年12月肇庆市第一人民医院住院及门诊患者分离的200株肺炎链球菌为研究对象，采用多重PCR分子分型方法进行血清型分型，再用单因子血清对6A/6B型进行细分。利用PCR方法对肺炎链球菌5种毒力基因（ply，pspA，nanA，psaA，lytA）进行检测，使用SPSS19.0统计分析结果。实验结果是200株肺炎链球菌男性患者(72.0%)比女性患者(28.0%)多。76.5%的标本来源于儿科，0~2岁的患者最多，占67.5%，其次是≥50岁患者为16.5%，3~5岁患者为6.0%。标本类型以痰为主，占92%。多重PCR法分型率为95.0%，血清型以19F（37.5%），6B(12%)，23F(10.0%)，19A(9.0%)，3(6.5%)，14(6%)，15B/15C(5.5%)为主。5种毒力基因检测阳性率分别为ply93.5%，pspA84.0%，nanA88.5%，psaA90.5%，lytA93.0%。8株血培养、1株脑脊液培养及19A、3和35A/35C/42三种血清型，5种毒力基因的阳性率均为100%。血清型14型和5型的 5种毒力基因阳性率都较低。结论是本地区200株肺炎链球菌的血清型以19F，6B，23F，19A，3，14，15B/15C为主，两岁以下的儿童和老年人感染率高。5种毒力基因保守性高，大部分菌株均存在。血清型不同，5种毒力基因的存在也略有不同，可为新型疫苗开发及疾病预防提供有利的依据。 三、研究的成效：本课题在《中国热带医学》杂志2020年3月第20卷第3期论著栏目发表《广东省肇庆市肺炎链球菌分子分型及毒力基因检测》一文。本研究是利用分子分型多重PCR技术对肇庆市第一人民医院分离的肺炎链球菌血清型分型，来掌握肺炎链球菌的主要血清型别，并采用PCR技术检测5种毒力基因：溶血素（ply）、表面蛋白A(PspA)、神经氨酸酶A（nanA）、表面粘附素A（psaA）和自溶素（lytA），了解肺炎链球菌毒力基因的存在情况。研究分析常见血清型的毒力基因阳性率情况，探讨出肺炎链球菌鉴定的新型方法，以及对新药和新型疫苗的开发给临床诊断及应用提供有利的数据。