目前卵巢癌治疗现状及困境卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，由于缺乏有效的筛查手段，约 70% 卵巢癌患者诊断时已属晚期。通过积极的手术治疗及铂类为基础的联合化疗，60% ～ 80%患者在一线治疗后能获得临床完全缓解，提高5 年生存率，但并没有提高治愈率。由于对常规化疗药物的耐药，晚期患者中的70% 将最终复发并需要接受挽救治疗。随着对卵巢癌分子生物学、细胞生物学、临床生物学的认识的提高，个性化分子靶向治疗成为热点，许多新的特异性作用于恶性肿瘤分子信号传导通路又有较少副作用的药物已经研发出来，然而其中一些并无临床治疗效果，而且在最初的治疗阶段发生耐药。经过前期的研究，我们推测 ATO 协同 Rad001 一方面可能通过抑制 mTOR、PI3K、PDK1 其中一项或者两项或者全部，或者激活 PTEN，使 AKT 去磷酸化诱导卵巢癌自噬与凋亡，另一方面如前所述 4E-BP1 去磷酸化后可与 eIF4E 紧密结合，限制帽依赖翻译的起始过程，抑制蛋白质的翻译，影响蛋白质合成。 因此，我们试图探索寻找 ATO 协同 Rad001 影响卵巢癌细胞 p-AKT 蛋白丰度的靶点如PI3K、PDK1、PTEN、mTORC1、mTORC2 及 eIF4E-4EBP1 复合物。我们用 IP 测定mTORC1 复合物、 mTORC2 复合物，7-methyl-GTP-Sepharose pull down 技术测定eIF4E-4EBP1 复合物蛋白水平；用 Westenblot 法测定 AKT 几个上、下游作用蛋白：PI3K、PDK1、PTEN、c-Myc、eIF4E、eIF4G、PDCD4、cyclin A2, B1, D1, and E, Mdm2, 蛋白及其磷酸化的蛋白水平；双荧光素酶报告基因实验测定帽子依赖性翻译和非帽子依赖性翻译。采用激光捕获显微切割技术（LCM）技术、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳及质谱法，确定异体移植卵巢癌小鼠肿瘤细胞中上述蛋白质的差异表达。试图找出 ATO 协同 Rad001 诱导卵巢癌细胞自噬与凋亡的作用机制，对蛋白质合成启动的影响，筛选关键的差异蛋白分子，为进一步临床应用治疗复发及耐药性卵巢癌提供理论依据。 本研究使用的基础实验方法、动物模型、分子生物学方法及蛋白组学方法是已经成熟应用的方法，并有自身实践基础。本课题组由掌握以上技术的成员组成，相关技术已广泛应用于科研工作，相关实验技术成熟，实验结果可信；本课题首次发现 ATO 可以协同 Rad001 抑制卵巢癌，诱导卵巢癌细胞自噬与凋亡，试图从信号转导通路及蛋白翻译启动解释这种联合用药治疗卵巢的理论基础，有很强的实用性，试图找到复发及耐药卵巢癌治疗新方法；本课题是利用分子机制指导药物联合应用，是在总结自身工作基础上的原始创新。 本研究主要使用于晚期卵巢癌一线治疗后复发后二线三线治疗后无效的患者，目前没有更好的治疗方法，实验找出机理后进行动物毒理实验，然后经过一期临床试验、二期临床试验、三期临床试验后应用于临床。 目前存在主要问题是要购入大量实验动物进行毒理实验，要申请课题基金进行下一步的实验，改进的方法是申请国家基金继续进行下一步的实验。